Diolch am ymweld â Nature.com.Mae gan y fersiwn porwr rydych chi'n ei ddefnyddio gefnogaeth CSS gyfyngedig.I gael y profiad gorau, rydym yn argymell eich bod yn defnyddio porwr wedi'i ddiweddaru (neu analluogi Modd Cydnawsedd yn Internet Explorer).Yn y cyfamser, er mwyn sicrhau cefnogaeth barhaus, byddwn yn gwneud y wefan heb arddulliau a JavaScript.
Mae ffotosensiteiddwyr effeithiol yn arbennig o bwysig ar gyfer y defnydd clinigol eang o ffototherapi.Fodd bynnag, mae ffotosensiteiddwyr confensiynol yn gyffredinol yn dioddef o amsugno tonfedd fer, ffotosefydlogrwydd annigonol, cynnyrch cwantwm isel o rywogaethau ocsigen adweithiol (ROS), a diffodd ROS a achosir gan agregu.Yma rydym yn adrodd am ffotosensiteiddiwr supramoleciwlaidd bron-is-goch (NIR) (RuDA) wedi'i gyfryngu gan hunan-gynulliad o gyfadeiladau organometalaidd Ru(II)-arene mewn hydoddiant dyfrllyd.Dim ond yn y cyflwr cyfanredol y gall RuDA gynhyrchu ocsigen singlet (1O2), ac mae'n arddangos ymddygiad cenhedlaeth 1O2 a achosir gan agregu amlwg oherwydd cynnydd sylweddol yn y broses groesi rhwng y system tripledi sengl.O dan weithred golau laser 808 nm, mae RuDA yn arddangos cynnyrch cwantwm 1O2 o 16.4% (gwyrdd indocyanin a gymeradwywyd gan FDA: ΦΔ = 0.2%) ac effeithlonrwydd trosi ffotothermol uchel o 24.2% (nanorods aur masnachol) gyda ffotosefydlogrwydd rhagorol.: 21.0%, nanoshells aur: 13.0%).Yn ogystal, gall RuDA-NPs â biocompatibility da gronni yn ffafriol mewn safleoedd tiwmor, gan achosi atchweliad tiwmor sylweddol yn ystod therapi ffotodynamig gyda gostyngiad o 95.2% yng nghyfaint tiwmor in vivo.Mae'r therapi ffotodeinamig hwn sy'n gwella agregu yn darparu strategaeth ar gyfer datblygu ffotosensiteiddwyr sydd â phriodweddau ffotoffisegol a ffotocemegol ffafriol.
O'i gymharu â therapi confensiynol, mae therapi ffotodynamig (PDT) yn driniaeth ddeniadol ar gyfer canser oherwydd ei fanteision sylweddol megis rheolaeth spatiotemporal gywir, an-ymledolrwydd, ymwrthedd dibwys i gyffuriau, a lleihau sgîl-effeithiau 1,2,3.O dan arbelydru ysgafn, gellir actifadu'r ffotosensitizers a ddefnyddir i ffurfio rhywogaethau ocsigen adweithiol iawn (ROS), gan arwain at apoptosis / necrosis neu ymatebion imiwn4,5. Fodd bynnag, mae gan y rhan fwyaf o ffotosensiteiddwyr confensiynol, megis clorinau, porffyrinau ac anthraquinones, amsugniad tonfedd gymharol fyr (amlder < 680 nm), gan arwain at dreiddiad golau gwael oherwydd amsugniad dwys moleciwlau biolegol (ee, haemoglobin a melanin) yn y rhanbarth gweledig6,7. Fodd bynnag, mae gan y rhan fwyaf o ffotosensiteiddwyr confensiynol, megis clorinau, porffyrinau ac anthraquinones, amsugniad tonfedd gymharol fyr (amlder < 680 nm), gan arwain at dreiddiad golau gwael oherwydd amsugniad dwys moleciwlau biolegol (ee, haemoglobin a melanin) yn y rhanbarth gweledig6,7. Однако большинство обычных фотосенсибилизаторов, таких как хлорины, порфирины и антрахиноны, обладают относительно коротковолновым поглощением (частота < 680 нм), что приводит к плохому проникновению света из-за интенсивного поглощения биологических молекул (например, гемоглобина и меланина) в видимая область6,7. Fodd bynnag, mae gan ffotosensiteiddwyr mwyaf cyffredin fel clorinau, porffyrinau ac anthraquinones amsugniad tonfedd cymharol fyr (< 680 nm) gan arwain at dreiddiad golau gwael oherwydd amsugniad dwys moleciwlau biolegol (ee haemoglobin a melanin) i'r rhanbarth gweladwy6,7.然而 ， 大多数 大多数 传统 光敏剂 ， ， 如 二 氢 卟酚 、 卟啉 和 蒽醌 ， 具有 具有 相对 较 短 的 的 （（频率 <680 nm） ， 因此 由于 由于 对 生物 生物 分子 分子 （（如 血红 蛋白 蛋白 黑色素）） 的 强烈 吸收 吸收 吸收 吸收 吸收导致光穿透性差.然而 ， ， 大多数 的 光敏剂 ， 二 二 氢 卟酚 、 卟啉 蒽醌 ， 具有 相对 相对 较 短 的 波长 吸收 （频率 频率 频率 <680 nm） 因此 由于 对 分子 分子 （（血红 血红 蛋白 和 和 黑色素）） 的 ， ， ， 吸收 吸收 吸收 吸收 吸收 吸收 吸收吸收 吸收 吸收 吸收 吸收 吸收 HI导致光穿透性差。 Однако большинство традиционных фотосенсибилизаторов, таких как хлорины, порфирины и антрахиноны, имеют относительно коротковолновое поглощение (частота < 680 нм) из-за сильного поглощения биомолекул, таких как гемоглобин и меланин, что приводит к плохому проникновению света. Fodd bynnag, mae gan y rhan fwyaf o ffotosensiteiddwyr traddodiadol fel clorinau, porffyrinau ac anthraquinones amsugniad tonfedd cymharol fyr (amlder < 680 nm) oherwydd amsugniad cryf o fiomoleciwlau fel haemoglobin a melanin gan arwain at dreiddiad golau gwael.Ardal weladwy 6.7.Felly, mae ffotosensitizers amsugno bron-is-goch (NIR) sy'n cael eu actifadu yn y “ffenestr therapiwtig” 700-900 nm yn addas iawn ar gyfer ffototherapi.Gan mai golau isgoch agos yw'r lleiaf sy'n cael ei amsugno gan feinweoedd biolegol, gall arwain at dreiddiad dyfnach a llai o ddifrod ffoto8,9.
Yn anffodus, yn gyffredinol mae gan ffotosensiteiddwyr sy'n amsugno NIR ffoto-sefydlogrwydd gwael, gallu cynhyrchu ocsigen sengl isel (1O2), a diffodd 1O2 a achosir gan agregu, sy'n cyfyngu ar eu cymhwysiad clinigol10,11.Er bod ymdrechion mawr wedi'u gwneud i wella priodweddau ffotoffisegol a ffotocemegol ffotosensiteiddwyr confensiynol, hyd yn hyn mae sawl adroddiad wedi nodi y gall ffotosensitizers sy'n amsugno NIR ddatrys yr holl broblemau hyn.Yn ogystal, mae sawl ffotosensitizers wedi dangos addewid ar gyfer cynhyrchu 1O212,13,14 yn effeithlon pan gaiff ei arbelydru â golau uwchlaw 800 nm, gan fod ynni'r ffoton yn lleihau'n gyflym yn y rhanbarth ger-IR.Mae triphenylamine (TFA) fel rhoddwr electron a [1,2,5]thiadiazole-[3,4-i]dipyrido[a,c]phenazine (TDP) fel grŵp derbyn electron math Rhoddwr-derbynnydd (DA) yn lliwio dosbarth o liwiau , amsugno bron-isgoch, sydd wedi cael eu hastudio'n helaeth ar gyfer biodelweddu agos-isgoch II a therapi ffotothermol (PTT) oherwydd eu bandgap cul.Felly, gellir defnyddio llifynnau math DA ar gyfer PDT gyda chyffro bron yn IR, er mai anaml y maent wedi cael eu hastudio fel ffotosensiteiddwyr ar gyfer PDT.
Mae'n hysbys bod effeithlonrwydd uchel croesfan intersystem (ISC) o ffotosensitizers yn hyrwyddo ffurfio 1O2.Strategaeth gyffredin ar gyfer symud y broses ISC yn ei blaen yw gwella cyplu sbin-orbit (SOC) ffotosensiteiddwyr trwy gyflwyno atomau trwm neu elfennau organig arbennig.Fodd bynnag, mae gan y dull hwn rai anfanteision a chyfyngiadau o hyd19,20.Yn ddiweddar, mae hunan-gynulliad supramoleciwlaidd wedi darparu dull deallus o'r gwaelod i fyny ar gyfer gwneuthuriad deunyddiau swyddogaethol ar y lefel foleciwlaidd,21,22 gyda nifer o fanteision mewn ffototherapi: (1) efallai y bydd gan ffotosensiteiddwyr hunan-ymgynnull y potensial i ffurfio strwythurau rhuban.Yn debyg i strwythurau electronig gyda dosbarthiad dwysach o lefelau egni oherwydd orbitau sy'n gorgyffwrdd rhwng blociau adeiladu.Felly, bydd y cydweddiad egni rhwng y cyflwr cynhyrfus singlet isaf (S1) a'r cyflwr cyffrous tripledi cyfagos (Tn) yn cael ei wella, sy'n fuddiol i'r broses ISC 23, 24 .(2) Bydd cynulliad supramoleciwlaidd yn lleihau ymlacio nad yw'n ymbelydrol yn seiliedig ar y mecanwaith cyfyngu ar gynnig intramoleciwlaidd (RIM), sydd hefyd yn hyrwyddo'r broses ISC 25, 26 .(3) Gall y cynulliad supramoleciwlaidd amddiffyn moleciwlau mewnol y monomer rhag ocsideiddio a diraddio, a thrwy hynny wella ffoto-sefydlogrwydd y ffotosensitizer yn fawr.O ystyried y manteision uchod, credwn y gall systemau ffotosensitizer supramoleciwlaidd fod yn ddewis arall addawol i oresgyn diffygion PDT.
Mae cyfadeiladau sy'n seiliedig ar Ru(II) yn llwyfan meddygol addawol ar gyfer cymwysiadau posibl wrth wneud diagnosis a therapi clefydau oherwydd eu priodweddau biolegol unigryw a deniadol28,29,30,31,32,33,34.Yn ogystal, mae'r toreth o gyflyrau cynhyrfus a phriodweddau ffotoffisegemegol tiwnadwy cyfadeiladau sy'n seiliedig ar Ru(II) yn darparu manteision mawr ar gyfer datblygu ffotosensitizers yn seiliedig ar Ru(II)35,36,37,38,39,40.Enghraifft nodedig yw'r cymhleth polypyridyl ruthenium(II) TLD-1433, sydd ar hyn o bryd mewn treialon clinigol Cam II fel ffotosensitydd ar gyfer trin canser y bledren ymledol nad yw'n gyhyr (NMIBC)41.Yn ogystal, defnyddir cyfadeiladau organometalaidd ruthenium(II) arene yn eang fel cyfryngau cemotherapiwtig ar gyfer triniaeth canser oherwydd eu gwenwyndra isel a rhwyddineb eu haddasu42,43,44,45.Gall priodweddau ïonig cyfadeiladau organometalaidd Ru(II)-arene nid yn unig wella hydoddedd gwael cromofforau DA mewn toddyddion cyffredin, ond hefyd wella cydosod cromofforau DA.Yn ogystal, gall strwythur hanner brechdan pseudooctahedrol y cyfadeiladau organometalig o Ru(II)-arenes atal yn sterilaidd agregiad H o gromofforau math DA, a thrwy hynny hwyluso ffurfio agregiad J gyda bandiau amsugno coch.Fodd bynnag, gall anfanteision cynhenid cyfadeiladau Ru(II)-arene, megis sefydlogrwydd isel a/neu fio-argaeledd gwael, effeithio ar effeithiolrwydd therapiwtig a gweithgaredd in vivo cyfadeiladau arene-Ru(II).Fodd bynnag, mae astudiaethau wedi dangos y gellir goresgyn yr anfanteision hyn trwy amgáu cymhlygion ruthenium â pholymerau biogydnaws trwy amgáu ffisegol neu gydgysylltiad cofalent.
Yn y gwaith hwn, rydym yn adrodd am gyfadeiladau cyfun DA o Ru(II)-arene (RuDA) gyda sbardun NIR trwy fond cydlynu rhwng y cromoffor DAD a'r moiety Ru(II)-arene.Gall y cyfadeiladau canlyniadol hunan-ymgynnull i fesiglau metalosupramoleciwlaidd mewn dŵr oherwydd rhyngweithiadau nad ydynt yn cofalent.Yn nodedig, cynysgaeddodd y cynulliad supramoleciwlaidd RuDA ag eiddo croesi rhyng-system a achosir gan polymerization, a gynyddodd effeithlonrwydd ISC yn sylweddol, a oedd yn ffafriol iawn ar gyfer PDT (Ffig. 1 A).Er mwyn cynyddu croniad tiwmor a biocompatibility in vivo, defnyddiwyd Pluronic F127 (PEO-PPO-PEO) a gymeradwywyd gan FDA i grynhoi RuDA47,48,49 i greu nanoronynnau RuDA-NP (Ffigur 1B) a oedd yn gweithredu fel PDT / Deuol hynod effeithlon modd PTT dirprwy .Mewn ffototherapi canser (Ffigur 1C), defnyddiwyd RuDA-NP i drin llygod noethlymun gyda thiwmorau MDA-MB-231 i astudio effeithiolrwydd PDT a PTT in vivo.
Darlun sgematig o fecanwaith ffotoffisegol RuDA mewn ffurfiau monomerig ac agregedig ar gyfer ffototherapi canser, synthesis o B RuDA-NPs a C RuDA-NPs ar gyfer PDT a PTT a weithredir gan NIR.
Paratowyd RuDA, sy'n cynnwys ymarferoldeb TPA a TDP, yn unol â'r weithdrefn a ddangosir yn Ffigur Atodol 1 (Ffigur 2A), a nodweddwyd RuDA gan sbectra NMR 1H a 13C, sbectrometreg màs ïoneiddiad electrospray, a dadansoddiad elfennol (Ffigurau Atodol 2-4). ).Cyfrifwyd map gwahaniaeth dwysedd electron RuDA o'r trawsnewidiad singlet isaf gan theori swyddogaeth dwysedd amser-ddibynnol (TD-DFT) i astudio'r broses trosglwyddo tâl.Fel y dangosir yn Ffigur Atodol 5, mae'r dwysedd electron yn drifftio'n bennaf o driphenylamine i'r uned derbynydd TDP ar ôl ffotoexcitation, y gellir ei briodoli i drosglwyddiad tâl mewnfoleciwlaidd nodweddiadol (CT).
Adeiledd cemegol Mwyn B Sbectra amsugno Mwyn mewn cymysgeddau o gymarebau amrywiol o DMF a dŵr.C Gwerthoedd amsugno normaleiddio RuDA (800 nm) ac ICG (779 nm) yn erbyn amser ar 0.5 W cm-2 o olau laser 808 nm.D Mae ffotoddiraddio ABDA yn cael ei ddangos gan ffurfiant 1O2 a achosir gan RuDA mewn cymysgeddau DMF/H2O gyda gwahanol gynnwys dŵr o dan weithred ymbelydredd laser gyda thonfedd o 808 nm a phŵer o 0.5 W/cm2.
Haniaethol - Defnyddiwyd sbectrosgopeg amsugno UV-gweladwy i astudio priodweddau hunan-gydosod Mwyn mewn cymysgeddau o DMF a dŵr mewn cymarebau amrywiol.Fel y dangosir yn ffig.2B, mae RuDA yn arddangos bandiau amsugno o 600 i 900 nm yn DMF gydag uchafswm band amsugno yn 729 nm.Arweiniodd cynyddu faint o ddŵr at symudiad coch graddol o'r uchafswm amsugno Ore i 800 nm, sy'n dynodi J-agregu Mwyn yn y system ymgynnull.Dangosir sbectra ffotoluminescence RuDA mewn gwahanol doddyddion yn Ffigur Atodol 6. Mae'n ymddangos bod RuDA yn arddangos goleuedd NIR-II nodweddiadol gyda thonfedd allyriadau uchaf o ca.1050 nm yn CH2Cl2 a CH3OH, yn y drefn honno.Mae symudiad mawr Stokes (tua 300 nm) o RuDA yn dynodi newid sylweddol yn geometreg y cyflwr cynhyrfus a ffurfiant gwladwriaethau cynhyrfus ynni isel.Penderfynwyd bod cynnyrch cwantwm ymoleuedd Mwyn yn CH2Cl2 a CH3OH yn 3.3 a 0.6%, yn y drefn honno.Fodd bynnag, mewn cymysgedd o fethanol a dŵr (5/95, v/v), gwelwyd ychydig o redshift o'r allyriadau a gostyngiad yn y cynnyrch cwantwm (0.22%), a all fod oherwydd hunan-gynulliad Mwyn .
I ddelweddu hunan-gynulliad ORE, fe wnaethom ddefnyddio microsgopeg grym atomig hylifol (AFM) i ddelweddu'r newidiadau morffolegol yn ORE mewn hydoddiant methanol ar ôl ychwanegu dŵr.Pan oedd y cynnwys dŵr yn is na 80%, ni welwyd unrhyw gydgrynhoi clir (Ffig Atodol 7).Fodd bynnag, gyda chynnydd pellach yn y cynnwys dŵr i 90-95%, ymddangosodd nanoronynnau bach, a oedd yn nodi hunan-gynulliad Mwyn.Yn ogystal, nid oedd arbelydru laser â thonfedd o 808 nm yn effeithio ar ddwysedd amsugno RuDA mewn dyfrllyd datrysiad (Ffig. 2C a Ffig Atodol 8).Mewn cyferbyniad, gostyngodd amsugnedd gwyrdd indocyanin (ICG fel rheolaeth) yn gyflym ar 779 nm, sy'n dangos ffotosefydlogrwydd rhagorol RuDA.Yn ogystal, archwiliwyd sefydlogrwydd RuDA-NPs mewn PBS (pH = 5.4, 7.4 a 9.0), 10% FBS a DMEM (glwcos uchel) gan sbectrosgopeg amsugno UV-weladwy ar wahanol adegau.Fel y dangosir yn Ffigur Atodol 9, gwelwyd newidiadau bach mewn bandiau amsugno RuDA-NP yn PBS ar pH 7.4/9.0, FBS a DMEM, sy'n nodi sefydlogrwydd rhagorol RuDA-NP.Fodd bynnag, mewn cyfrwng asidig (рН = 5.4) darganfuwyd hydrolysis Mwyn.Fe wnaethom hefyd werthuso ymhellach sefydlogrwydd RuDA a RuDA-NP gan ddefnyddio dulliau cromatograffaeth hylif perfformiad uchel (HPLC).Fel y dangosir yn Ffigur Atodol 10, roedd RuDA yn sefydlog mewn cymysgedd o fethanol a dŵr (50/50, v/v) am yr awr gyntaf, a gwelwyd hydrolysis ar ôl 4 awr.Fodd bynnag, dim ond uchafbwynt ceugrwm-amgrwm eang a welwyd ar gyfer NPs RuDA.Felly, defnyddiwyd cromatograffaeth treiddiad gel (GPC) i asesu sefydlogrwydd NPs RuDA yn PBS (pH = 7.4).Fel y dangosir yn Ffigur Atodol 11, ar ôl 8 awr o ddeori o dan yr amodau a brofwyd, ni newidiodd uchder brig, lled brig ac arwynebedd brig NP RuDA yn sylweddol, gan nodi sefydlogrwydd rhagorol NP RuDA.Yn ogystal, dangosodd delweddau TEM fod morffoleg y nanoronynnau RuDA-NP bron yn ddigyfnewid ar ôl 24 awr mewn byffer PBS gwanedig (pH = 7.4, Ffig Atodol 12).
Oherwydd y gall hunan-gynulliad roi gwahanol nodweddion swyddogaethol a chemegol ar Mwyn, gwelsom ryddhau asid dimalonic 9,10-anthracenediylbis (methylene) (ABDA, dangosydd 1O2) mewn cymysgeddau methanol-dŵr.Mwyn gyda chynnwys dŵr gwahanol50.Fel y dangosir yn Ffigur 2D a Ffigur Atodol 13, ni welwyd unrhyw ddiraddio ABDA pan oedd y cynnwys dŵr yn is na 20%.Gyda chynnydd mewn lleithder i 40%, digwyddodd diraddio ABDA, fel y dangosir gan ostyngiad yn nwysedd fflworoleuedd ABDA.Gwelwyd hefyd bod cynnwys dŵr uwch yn arwain at ddiraddiad cyflymach, sy'n awgrymu bod hunan-gynulliad RuDA yn angenrheidiol ac yn fuddiol ar gyfer diraddio ABDA.Mae'r ffenomen hon yn wahanol iawn i gromofforau modern ACQ (quenching a achosir gan agregu).Pan gaiff ei arbelydru â laser â thonfedd o 808 nm, mae'r cynnyrch cwantwm o 1O2 RuDA mewn cymysgedd o 98% H2O / 2% DMF yn 16.4%, sydd 82 gwaith yn uwch na chynnyrch ICG (ΦΔ = 0.2%)51, gan ddangos effeithlonrwydd cenhedlaeth rhyfeddol 1O2 RuDA yn y cyflwr agregu.
Troelli electronau gan ddefnyddio 2,2,6,6-tetramethyl-4-piperidinone (TEMP) a 5,5-dimethyl-1-pyrroline N-ocsid (DMPO) fel trapiau sbin Defnyddiwyd sbectrosgopeg cyseiniant (ESR) i nodi'r rhywogaethau canlyniadol AFK.gan RuDA.Fel y dangosir yn Ffigur Atodol 14, cadarnhawyd bod 1O2 yn cael ei gynhyrchu ar amseroedd arbelydru rhwng 0 a 4 munud.Yn ogystal, pan gafodd RuDA ei ddeor â DMPO o dan arbelydru, canfuwyd signal EPR pedair llinell nodweddiadol o 1:2:2:1 DMPO-OH· adduct, sy'n dynodi ffurfiant radicalau hydrocsyl (OH·).Yn gyffredinol, mae'r canlyniadau uchod yn dangos gallu RuDA i ysgogi cynhyrchu ROS trwy broses ffotosensiteiddio math I/II deuol.
Er mwyn deall yn well briodweddau electronig RuDA mewn ffurfiau monomerig ac agregedig, cyfrifwyd orbitalau moleciwlaidd ffin RuDA mewn ffurfiau monomerig a dimeric gan ddefnyddio'r dull DFT.Fel y dangosir yn ffig.3A, mae'r orbital moleciwlaidd sydd wedi'i feddiannu uchaf (HOMO) o RuDA monomerig yn cael ei ddadleoli ar hyd asgwrn cefn y ligand ac mae'r orbital moleciwlaidd gwag isaf (LUMO) wedi'i ganoli ar yr uned dderbyn TDP.I'r gwrthwyneb, mae'r dwysedd electronau yn y HOMO dimeric wedi'i ganolbwyntio ar ligand un moleciwl RuDA, tra bod y dwysedd electronau yn y LUMO wedi'i ganolbwyntio'n bennaf ar uned dderbyn moleciwl RuDA arall, sy'n dangos bod RuDA yn y dimer.Nodweddion CT.
A Cyfrifir HOMO a LUMO Mwyn mewn ffurfiau monomerig a dimeric.B Lefelau egni singlet a thripledi Mwyn mewn monomerau a dimers.C Lefelau amcangyfrifedig RuDA a sianeli ISC posibl fel monomerig C a dimeric D. Mae saethau'n dynodi sianeli ISC posibl.
Dadansoddwyd dosbarthiad electronau a thyllau yn nhaleithiau cynhyrfus singlet ynni isel RuDA yn y ffurfiau monomerig a dimeric gan ddefnyddio meddalwedd Multiwfn 3.852.53, a gyfrifwyd gan ddefnyddio'r dull TD-DFT.Fel y nodir ar y label ychwanegol.Fel y dangosir yn Ffigurau 1-2, mae tyllau RDA monomerig yn cael eu dadleoli'n bennaf ar hyd asgwrn cefn y ligand yn y cyflyrau cynhyrfus singlet hyn, tra bod electronau wedi'u lleoli'n bennaf yn y grŵp TDP, gan ddangos nodweddion intramoleciwlaidd CT.Yn ogystal, ar gyfer y cyflyrau cynhyrfus sengl hyn, mae mwy neu lai o orgyffwrdd rhwng tyllau ac electronau, sy'n awgrymu bod y cyflyrau cynhyrfus sengl hyn yn gwneud rhywfaint o gyfraniad gan gyffro lleol (LE).Ar gyfer dimers, yn ogystal â nodweddion CT a LE mewnfoleciwlaidd, arsylwyd cyfran benodol o nodweddion CT rhyngfoleciwlaidd yn y gwahanol daleithiau, yn enwedig S3, S4, S7, a S8, yn seiliedig ar ddadansoddiad CT rhyngfoleciwlaidd, gyda thrawsnewidiadau rhyngfoleciwlaidd CT fel y prif rai. (Tabl Atodol).3).
Er mwyn deall y canlyniadau arbrofol yn well, fe wnaethom archwilio ymhellach briodweddau gwladwriaethau cyffrous RuDA i archwilio'r gwahaniaethau rhwng monomerau a dimers (Tablau Atodol 4-5).Fel y dangosir yn Ffigur 3B, mae lefelau egni cyflyrau cynhyrfus singlet a thripledi'r dimer yn llawer dwysach na rhai'r monomer, sy'n helpu i leihau'r bwlch ynni rhwng S1 a Tn. Adroddwyd y gallai'r trawsnewidiadau ISC gael eu gwireddu o fewn bwlch ynni bach (ΔES1-Tn <0.3 eV) rhwng S1 a Tn54. Adroddwyd y gallai'r trawsnewidiadau ISC gael eu gwireddu o fewn bwlch ynni bach (ΔES1-Tn < 0.3 eV) rhwng S1 a Tn54. Сообщалось, что переходы ISC могут быть реализованы в пределах небольшой энергетической 1 В Ѝнергетической 1 Ѝнергетической 1 В В В В В 1 В В В В В В В 1 В В В В В 1 В В В 1 Adroddwyd y gellir gwireddu trawsnewidiadau ISC o fewn bwlch ynni bach (ΔES1-Tn <0.3 eV) rhwng S1 a Tn54.据报道，ISC 跃迁可以在S1和Tn54之间的小能隙（ΔES1-Tn < 0.3 eV）内实现。据报道，ISC 跃迁可以在S1和Tn54之间的小能隙（ΔES1-Tn < 0.3 eV）内实现。 Собщалось, что переход ISC может ыть реализова в пределах неболшой энергетиче щ1 щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ щ ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж ж жOLEAR. Adroddwyd y gellir gwireddu'r trawsnewidiad ISC o fewn bwlch ynni bach (ΔES1-Tn <0.3 eV) rhwng S1 a Tn54.Yn ogystal, dim ond un orbitol, wedi'i feddiannu neu heb ei feddiannu, sy'n gorfod bod yn wahanol o ran cyflyrau sengl a thripledi rhwymedig i ddarparu integryn SOC nad yw'n sero.Felly, yn seiliedig ar y dadansoddiad o'r egni cyffroi a'r trawsnewidiad orbitol, dangosir holl sianeli posibl y trawsnewidiad ISC yn y Ffigys.3C,D.Yn nodedig, dim ond un sianel ISC sydd ar gael yn y monomer, tra bod gan y ffurf dimeric bedair sianel ISC a all wella'r trosglwyddiad ISC.Felly, mae'n rhesymol tybio po fwyaf o foleciwlau RuDA sy'n cael eu hagregu, y mwyaf hygyrch fydd y sianeli ISC.Felly, gall agregau RuDA ffurfio strwythurau electronig dau fand yn y taleithiau sengl a thripledi, gan leihau'r bwlch ynni rhwng S1 a Tn sydd ar gael, a thrwy hynny gynyddu effeithlonrwydd ISC i hwyluso cynhyrchu 1O2.
Er mwyn egluro'r mecanwaith sylfaenol ymhellach, gwnaethom syntheseiddio cyfansawdd cyfeirio o'r cymhleth arene-Ru(II) (RuET) trwy ddisodli dau grŵp ethyl â dau grŵp ffenyl triphenylamine yn RuDA (Ffig. 4A, ar gyfer nodweddu llawn, gweler ESI, Atodol 15). -21 ) O'r rhoddwr (diethylamine) i'r derbynnydd (TDF), mae gan RuET yr un nodweddion CT intramoleciwlaidd â RuDA.Yn ôl y disgwyl, dangosodd sbectrwm amsugno RuET yn DMF fand trosglwyddo tâl ynni isel gydag amsugno cryf yn y rhanbarth isgoch agos tua 600-1100 nm (Ffig. 4 B).Yn ogystal, gwelwyd agregu RuET hefyd gyda chynnwys dŵr cynyddol, a adlewyrchwyd yn redshift yr uchafswm amsugno, a gadarnhawyd ymhellach gan ddelweddu hylif AFM (Ffig Atodol 22).Mae'r canlyniadau'n dangos y gall RuET, fel RuDA, ffurfio cyflyrau intramoleciwlaidd a hunan-ymgynnull yn strwythurau cyfanredol.
Strwythur cemegol RuET.B Sbectra amsugno RuET mewn cymysgeddau o gymarebau amrywiol o DMF a dŵr.Lleiniau C EIS Nyquist ar gyfer RuDA a RuET.Ymatebion ffotogyfredol D o RuDA a RuET o dan weithred ymbelydredd laser gyda thonfedd o 808 nm.
Gwerthuswyd ffotoddiraddio ABDA ym mhresenoldeb RuET trwy arbelydru â laser â thonfedd o 808 nm.Yn syndod, ni welwyd unrhyw ddiraddiad o ABDA mewn ffracsiynau dŵr amrywiol (Ffig Atodol 23).Rheswm posibl yw na all RuET ffurfio strwythur electronig bandio yn effeithlon oherwydd nad yw'r gadwyn ethyl yn hyrwyddo trosglwyddo tâl rhyngfoleciwlaidd effeithlon.Felly, perfformiwyd sbectrosgopeg rhwystriant electrocemegol (EIS) a mesuriadau ffotolifol dros dro i gymharu priodweddau ffotoelectrocemegol RuDA a RuET.Yn ôl plot Nyquist (Ffigur 4C), mae RuDA yn dangos radiws llawer llai na RuET, sy'n golygu bod gan RuDA56 gludiant electronau rhyngfoleciwlaidd cyflymach a dargludedd gwell.Yn ogystal, mae dwysedd ffotocurrent RuDA yn llawer uwch na dwysedd RuET (Ffig. 4D), gan gadarnhau effeithlonrwydd trosglwyddo tâl gwell o RuDA57.Felly, mae'r grŵp ffenyl o triphenylamine yn Ore yn chwarae rhan bwysig wrth ddarparu trosglwyddiad tâl rhyngfoleciwlaidd a ffurfio strwythur electronig bandio.
Er mwyn cynyddu croniad tiwmor a biogydnawsedd in vivo, gwnaethom grynhoi RuDA ymhellach gyda F127.Penderfynwyd mai diamedr hydrodynamig cyfartalog RuDA-NPs oedd 123.1 nm gyda dosbarthiad cul (PDI = 0.089) gan ddefnyddio'r dull gwasgaru golau deinamig (DLS) (Ffigur 5A), a oedd yn hyrwyddo cronni tiwmor trwy gynyddu athreiddedd a chadw.EPR) effaith.Dangosodd y delweddau TEM fod gan NPs Mwyn siâp sfferig unffurf gyda diamedr cyfartalog o 86 nm.Yn nodedig, roedd uchafswm amsugno RuDA-NPs yn ymddangos yn 800 nm (Ffig Atodol 24), sy'n nodi y gallai RuDA-NPs gadw swyddogaethau a phriodweddau RuDAs hunan-gydosod.Y cynnyrch cwantwm ROS a gyfrifwyd ar gyfer Mwyn NP yw 15.9%, sy'n debyg i Mwyn.Astudiwyd priodweddau ffotothermol NPs RuDA o dan weithred ymbelydredd laser gyda thonfedd o 808 nm gan ddefnyddio camera isgoch.Fel y dangosir yn ffig.5B, C, profodd y grŵp rheoli (PBS yn unig) ychydig o gynnydd mewn tymheredd, tra cynyddodd tymheredd yr hydoddiant RuDA-NPs yn gyflym gyda thymheredd cynyddol (ΔT) i 15.5, 26.1, a 43.0 ° C.Roedd crynodiadau uchel yn 25, 50, a 100 µM, yn y drefn honno, sy'n dangos effaith ffotothermol gref o NPs RuDA.Yn ogystal, cymerwyd mesuriadau cylch gwresogi / oeri i werthuso sefydlogrwydd ffotothermol RuDA-NP a'i gymharu ag ICG.Nid oedd tymheredd NPs Mwyn yn gostwng ar ôl pum cylch gwresogi / oeri (Ffig. 5D), sy'n dangos sefydlogrwydd ffotothermol rhagorol NPs Mwyn.Mewn cyferbyniad, mae ICG yn arddangos sefydlogrwydd ffotothermol is fel y gwelir o ddiflaniad ymddangosiadol y llwyfandir tymheredd ffotothermol o dan yr un amodau.Yn ôl y dull blaenorol58, cyfrifwyd effeithlonrwydd trosi ffotothermol (PCE) RuDA-NP fel 24.2%, sy'n uwch na'r deunyddiau ffotothermol presennol fel nanorodau aur (21.0%) a nanoshells aur (13.0%)59.Felly, mae NP Ore yn arddangos eiddo ffotothermol rhagorol, sy'n eu gwneud yn asiantau PTT addawol.
Dadansoddiad o ddelweddau DLS a TEM o NPs RuDA (mewnosod).B Delweddau thermol o grynodiadau amrywiol o NPs RuDA sy'n agored i ymbelydredd laser ar donfedd o 808 nm (0.5 W cm-2).C Cromliniau trosi ffotothermol o grynodiadau amrywiol o NPs mwyn, sy'n ddata meintiol.B. D Cynnydd tymheredd ORE NP ac ICG dros 5 cylch gwresogi-oeri.
Gwerthuswyd ffotocytowenwyndra NPs RuDA yn erbyn celloedd canser y fron dynol MDA-MB-231 in vitro.Fel y dangosir yn ffig.Dangosodd 6A, B, RuDA-NPs a RuDA sytowenwyndra dibwys yn absenoldeb arbelydru, gan awgrymu gwenwyndra tywyll is o RuDA-NPs a RuDA.Fodd bynnag, ar ôl dod i gysylltiad ag ymbelydredd laser ar donfedd o 808 nm, dangosodd NPs RuDA a RuDA ffotocytotoxicity cryf yn erbyn celloedd canser MDA-MB-231 gyda gwerthoedd IC50 (crynodiad ataliol hanner-uchafswm) o 5.4 a 9.4 μM, yn y drefn honno, gan ddangos bod gan RuDA-NP a RuDA botensial ar gyfer ffototherapi canser.Yn ogystal, ymchwiliwyd ymhellach i ffotocytowenwyndra RuDA-NP a RuDA ym mhresenoldeb fitamin C (Vc), sborionwr ROS, i egluro rôl ROS mewn sytowenwyndra a achosir gan olau.Yn amlwg, cynyddodd hyfywedd celloedd ar ôl ychwanegu Vc, a gwerthoedd IC50 NPs RuDA a RuDA oedd 25.7 a 40.0 μM, yn y drefn honno, sy'n profi rôl bwysig ROS yn ffotocytowenwyndra NPs RuDA a RuDA.Sytowenwyndra a achosir gan ysgafn o RuDA-NPs a RuDA mewn celloedd canser MDA-MB-231 trwy staenio celloedd byw / marw gan ddefnyddio calcein AM (fflworoleuedd gwyrdd ar gyfer celloedd byw) a propidium ïodid (PI, fflworoleuedd coch ar gyfer celloedd marw).wedi'i gadarnhau gan gelloedd) fel stilwyr fflworoleuol.Fel y dangosir yn Ffigur 6C, roedd celloedd a gafodd eu trin â RuDA-NP neu RuDA yn parhau i fod yn hyfyw heb arbelydru, fel y dangosir gan fflworoleuedd gwyrdd dwys.I'r gwrthwyneb, o dan arbelydru laser, dim ond fflworoleuedd coch a welwyd, sy'n cadarnhau ffotocytowenwyndra effeithiol NPs RuDA neu RuDA.Mae'n werth nodi bod fflworoleuedd gwyrdd wedi ymddangos ar ôl ychwanegu Vc, sy'n dangos bod ffotocytowenwyndra NPs RuDA a RuDA yn cael eu torri.Mae'r canlyniadau hyn yn gyson â phrofion ffotocytowenwyndra in vitro.
Hyfywedd dos-ddibynnol o gelloedd A RuDA- a B RuDA-NP mewn celloedd MDA-MB-231 ym mhresenoldeb neu absenoldeb Vc (0.5 mM), yn y drefn honno.Bariau gwall, cymedrig ± gwyriad safonol (n = 3). Profion t dwy ochr di-bâr *p < 0.05, **p < 0.01, ac ***p < 0.001. Profion t dwy ochr di-bâr *p < 0.05, **p < 0.01, ac ***p < 0.001. Непарные двусторонние t-критерии *p <0,05, **p <0,01 ac ***p <0,001. Profion t dwy gynffon heb eu paru *p<0.05, **p<0.01, a ***p<0.001.未配对的双边t 检验*p < 0.05、**p < 0.01 和 *** p < 0.001。未配对的双边t 检验*p < 0.05、**p < 0.01 和 *** p < 0.001。 Непарные двусторонние t-тесты *p <0,05, **p <0,01 ac ***p <0,001. Profion t dwy gynffon heb eu paru *p<0.05, **p<0.01, a ***p<0.001.C Dadansoddiad staenio celloedd byw/marw gan ddefnyddio calcein AM a propidium ïodid fel chwilwyr fflworoleuol.Bar graddfa: 30 µm.Dangosir delweddau cynrychioliadol o dri ailadrodd biolegol o bob grŵp.D Delweddau fflworoleuedd confocal o gynhyrchu ROS mewn celloedd MDA-MB-231 o dan amodau triniaeth gwahanol.Mae fflworoleuedd DCF gwyrdd yn dynodi presenoldeb ROS.Arbelydru â laser â thonfedd o 808 nm gyda phŵer o 0.5 W/cm2 am 10 munud (300 J/cm2).Bar graddfa: 30 µm.Dangosir delweddau cynrychioliadol o dri ailadrodd biolegol o bob grŵp.E Dadansoddiad triniaeth cytometreg llif RuDA-NPs (50 µM) neu RuDA (50 µM) gyda neu heb laser 808 nm (0.5 W cm-2) ym mhresenoldeb ac absenoldeb Vc (0.5 mM) am 10 munud.Dangosir delweddau cynrychioliadol o dri ailadrodd biolegol o bob grŵp.F Nrf-2, HSP70 a HO-1 o gelloedd MDA-MB-231 wedi'u trin â RuDA-NPs (50 µM) gyda neu heb arbelydru laser 808 nm (0.5 W cm-2, 10 min, 300 J cm-2), celloedd yn mynegi 2).Dangosir delweddau cynrychioliadol o ddau ailadroddiad biolegol o bob grŵp.
Archwiliwyd cynhyrchiad ROS mewngellol mewn celloedd MDA-MB-231 gan ddefnyddio'r dull staenio 2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA).Fel y dangosir yn ffig.6D, dangosodd celloedd a gafodd eu trin â RuDA-NPs neu RuDA fflworoleuedd gwyrdd amlwg wrth eu harbelydru â'r laser 808 nm, sy'n nodi bod gan RuDA-NPs a RuDA allu effeithlon i gynhyrchu ROS.I'r gwrthwyneb, yn absenoldeb golau neu ym mhresenoldeb Vc, dim ond signal fflwroleuol gwan o'r celloedd a arsylwyd, a oedd yn nodi ffurfiad bach o ROS.Pennwyd lefelau ROS mewngellol mewn celloedd RuDA-NP a chelloedd MDA-MB-231 a driniwyd gan RuDA ymhellach gan cytometreg llif.Fel y dangosir yn Ffigur Atodol 25, cynyddodd y dwysedd fflworoleuedd cymedrig (MFI) a gynhyrchwyd gan RuDA-NPs a RuDA o dan arbelydru laser 808 nm yn sylweddol tua 5.1 a 4.8 gwaith, yn y drefn honno, o'i gymharu â'r grŵp rheoli, gan gadarnhau eu ffurfiad ardderchog AFK.gallu.Fodd bynnag, roedd lefelau ROS mewngellol mewn celloedd RuDA-NP neu MDA-MB-231 a gafodd eu trin â RuDA ond yn debyg i reolaethau heb arbelydru laser neu ym mhresenoldeb Vc, yn debyg i ganlyniadau dadansoddiad fflworoleuedd confocal.
Dangoswyd mai mitocondria yw prif darged cyfadeiladau Ru(II)-arene60.Felly, ymchwiliwyd i leoleiddio isgellog RuDA a RuDA-NPs.Fel y dangosir yn Ffigur Atodol 26, mae RuDA a RuDA-NP yn dangos proffiliau dosbarthiad cellog tebyg gyda'r croniad uchaf mewn mitocondria (62.5 ± 4.3 a 60.4 ± 3.6 ng / mg protein, yn y drefn honno).Fodd bynnag, dim ond ychydig bach o Ru a ddarganfuwyd yn ffracsiynau niwclear Ore a NP Ore (3.5 a 2.1%, yn y drefn honno).Roedd y ffracsiwn celloedd sy'n weddill yn cynnwys ruthenium gweddilliol: 31.7% (30.6 ± 3.4 ng / mg protein) ar gyfer RuDA a 42.9% (47.2 ± 4.5 ng / mg protein) ar gyfer RuDA-NPs.Yn gyffredinol, mae Mwyn a NP Ore yn cronni'n bennaf mewn mitocondria.I asesu camweithrediad mitocondriaidd, fe wnaethom ddefnyddio staenio JC-1 a MitoSOX Red i asesu potensial pilen mitocondriaidd a chynhwysedd cynhyrchu uwchocsid, yn y drefn honno.Fel y dangosir yn Ffig. Gall ysgogi dadbolariad pilen mitocondriaidd a chynhyrchu uwchocsid yn effeithiol.Yn ogystal, pennwyd mecanwaith marwolaeth celloedd gan ddefnyddio dadansoddiad cytometreg llif o anecsin V-FITC/propidium ïodide (PI).Fel y dangosir yn Ffigur 6E, pan gafodd ei arbelydru â laser 808 nm, ysgogodd RuDA a RuDA-NP gyfradd apoptosis cynnar sylweddol uwch (pedrant dde isaf) mewn celloedd MDA-MB-231 o'i gymharu â PBS neu PBS ynghyd â laser.celloedd wedi'u prosesu.Fodd bynnag, pan ychwanegwyd Vc, gostyngodd cyfradd apoptosis RuDA a RuDA-NP yn sylweddol o 50.9% a 52.0% i 15.8% a 17.8%, yn y drefn honno, sy'n cadarnhau rôl bwysig ROS yn ffotocytowenwyndra RuDA a RuDA-NP..Yn ogystal, gwelwyd celloedd necrotig bach ym mhob grŵp a brofwyd (cwadrant chwith uchaf), sy'n awgrymu y gallai apoptosis fod y prif ffurf o farwolaeth celloedd a achosir gan RuDA a RuDA-NPs.
Gan fod difrod straen ocsideiddiol yn brif benderfynydd apoptosis, ymchwiliwyd i'r ffactor niwclear sy'n gysylltiedig ag erythroid 2, ffactor 2 (Nrf2) 62, rheolydd allweddol y system gwrthocsidiol, yn MDA-MB-231 a driniwyd gan RuDA-NPs.Mecanwaith gweithredu NPs RuDA a achosir gan arbelydru.Ar yr un pryd, canfuwyd mynegiant y protein heme oxygenase 1 (HO-1) i lawr yr afon hefyd.Fel y dangosir yn Ffigur 6F a Ffigur Atodol 29, cynyddodd ffototherapi cyfryngol RuDA-NP lefelau mynegiant Nrf2 a HO-1 o'i gymharu â'r grŵp PBS, gan nodi y gallai RuDA-NPs ysgogi llwybrau signalau straen ocsideiddiol.Yn ogystal, i astudio effaith ffotothermol RuDA-NPs63, gwerthuswyd mynegiant y protein sioc gwres Hsp70 hefyd.Mae'n amlwg bod celloedd a gafodd eu trin ag arbelydru laser RuDA-NPs + 808 nm yn dangos mynegiant cynyddol o Hsp70 o'i gymharu â'r ddau grŵp arall, gan adlewyrchu ymateb cellog i hyperthermia.
Fe wnaeth y canlyniadau in vitro rhyfeddol ein hysgogi i ymchwilio i berfformiad in vivo RuDA-NP mewn llygod noethlymun gyda thiwmorau MDA-MB-231.Astudiwyd dosbarthiad meinwe NPs RuDA trwy bennu cynnwys ruthenium yn yr afu, y galon, y ddueg, yr arennau, yr ysgyfaint, a thiwmorau.Fel y dangosir yn ffig.7A, ymddangosodd uchafswm cynnwys NPs Mwyn mewn organau arferol ar yr amser arsylwi cyntaf (4 h), tra bod y cynnwys mwyaf yn cael ei bennu mewn meinweoedd tiwmor 8 awr ar ôl y pigiad, o bosibl oherwydd NPs Mwyn.Effaith EPR LF.Yn ôl y canlyniadau dosbarthu, cymerwyd hyd gorau posibl y driniaeth â mwyn NP 8 awr ar ôl ei roi.Er mwyn dangos y broses o gronni RuDA-NPs mewn safleoedd tiwmor, cafodd priodweddau ffotoacwstig (PA) RuDA-NPs eu monitro trwy gofnodi signalau PA o RuDA-NPs ar wahanol adegau ar ôl y pigiad.Yn gyntaf, aseswyd signal PA o RuDA-NP in vivo trwy recordio delweddau PA o safle tiwmor ar ôl pigiad intratumoral o RuDA-NP.Fel y dangosir yn Ffigur Atodol 30, dangosodd RuDA-NPs signal PA cryf, ac roedd cydberthynas gadarnhaol rhwng crynodiad RuDA-NP a dwyster signal PA (Ffigur Atodol 30A).Yna, cofnodwyd delweddau PA in vivo o safleoedd tiwmor ar ôl pigiad mewnwythiennol o RuDA a RuDA-NP ar wahanol adegau ar ôl y pigiad.Fel y dangosir yn Ffigur 7B, cynyddodd y signal PA o RuDA-NPs o'r safle tiwmor yn raddol gydag amser a chyrhaeddodd llwyfandir ar 8 awr ar ôl y pigiad, yn gyson â chanlyniadau dosbarthiad meinwe a bennwyd gan ddadansoddiad ICP-MS.Mewn perthynas â RuDA (Ffig Atodol 30B), ymddangosodd y dwysedd signal PA uchaf 4 awr ar ôl y pigiad, gan ddangos cyfradd mynediad cyflym o RuDA i'r tiwmor.Yn ogystal, archwiliwyd ymddygiad ysgarthol RuDA a RuDA-NPs trwy bennu faint o rutheniwm mewn wrin ac ysgarthion gan ddefnyddio ICP-MS.Y prif lwybr dileu ar gyfer RuDA (Ffig. Atodol 31) a RuDA-NPs (Ffig. 7C) yw trwy'r ysgarthion, a gwelwyd clirio RuDA a RuDA-NPs yn effeithiol yn ystod y cyfnod astudio 8-diwrnod, sy'n golygu bod RuDA a gellir dileu RuDA-NPs yn effeithlon o'r corff heb wenwyndra hirdymor.
A. Pennwyd dosbarthiad ex vivo RuDA-NP mewn meinweoedd llygoden gan y cynnwys Ru (canran y dos a weinyddir o Ru (ID) fesul gram o feinwe) ar wahanol adegau ar ôl y pigiad.Gwyriad safonol cymedrig yw data (n = 3). Profion t dwy ochr di-bâr *p < 0.05, **p < 0.01, ac ***p < 0.001. Profion t dwy ochr di-bâr *p < 0.05, **p < 0.01, ac ***p < 0.001. Непарные двусторонние t-критерии *p <0,05, **p <0,01 ac ***p <0,001. Profion t dwy gynffon heb eu paru *p<0.05, **p<0.01, a ***p<0.001.未配对的双边t 检验*p < 0.05、**p < 0.01 和 *** p < 0.001。未配对的双边t 检验*p < 0.05、**p < 0.01 和 *** p < 0.001。 Непарные двусторонние t-тесты *p <0,05, **p <0,01 ac ***p <0,001. Profion t dwy gynffon heb eu paru *p<0.05, **p<0.01, a ***p<0.001.Delweddau B PA o safleoedd tiwmor in vivo ar gyffro o 808 nm ar ôl gweinyddu RuDA-NPs mewnwythiennol (10 µmol kg-1) ar wahanol adegau.Ar ôl rhoi NPs RuDA yn fewnwythiennol (10 µmol kg-1), cafodd C Ru ei ysgarthu o lygod ag wrin ac ysgarthion ar wahanol gyfnodau amser.Gwyriad safonol cymedrig yw data (n = 3).
Astudiwyd cynhwysedd gwresogi RuDA-NP in vivo mewn llygod nude gyda thiwmorau MDA-MB-231 a RuDA i'w cymharu.Fel y dangosir yn ffig.8A ac atodol Ffig. 32, dangosodd y grŵp rheoli (heli) lai o newid tymheredd (ΔT ≈ 3 ° C) ar ôl 10 munud o amlygiad parhaus.Fodd bynnag, cynyddodd tymheredd RuDA-NPs a RuDA yn gyflym gyda thymheredd uchaf o 55.2 a 49.9 ° C, yn y drefn honno, gan ddarparu digon o hyperthermia ar gyfer therapi canser in vivo.Gall y cynnydd a welwyd mewn tymheredd uchel ar gyfer NPs RuDA (ΔT ≈ 24 ° C) o'i gymharu â RuDA (ΔT ≈ 19 ° C) fod oherwydd ei athreiddedd a'i groniad gwell mewn meinweoedd tiwmor oherwydd yr effaith EPR.
Delweddau thermol isgoch o lygod â thiwmorau MDA-MB-231 wedi'u harbelydru â laser 808 nm ar wahanol adegau 8 awr ar ôl y pigiad.Dangosir delweddau cynrychioliadol o bedwar ailadrodd biolegol o bob grŵp.B Cyfaint tiwmor cymharol a C Màs tiwmor cyfartalog gwahanol grwpiau o lygod yn ystod triniaeth.D Cromlinau pwysau corff gwahanol grwpiau o lygod.Arbelydru â laser â thonfedd o 808 nm gyda phŵer o 0.5 W/cm2 am 10 munud (300 J/cm2).Bariau gwall, cymedrig ± gwyriad safonol (n = 3). Profion t dwy ochr di-bâr *p < 0.05, **p < 0.01, ac ***p < 0.001. Profion t dwy ochr di-bâr *p < 0.05, **p < 0.01, ac ***p < 0.001. Непарные двусторонние t-критерии *p <0,05, **p <0,01 ac ***p <0,001. Profion t dwy gynffon heb eu paru *p<0.05, **p<0.01, a ***p<0.001.未配对的双边t 检验*p < 0.05、**p < 0.01 和 *** p < 0.001。未配对的双边t 检验*p < 0.05、**p < 0.01 和 *** p < 0.001。 Непарные двусторонние t-тесты *p <0,05, **p <0,01 ac ***p <0,001. Profion t dwy gynffon heb eu paru *p<0.05, **p<0.01, a ***p<0.001. E delweddau staenio H&E o brif organau a thiwmorau o wahanol grwpiau triniaeth, gan gynnwys Halen, Halen + Laser, RuDA, RuDA + Laser, RuDA-NPs, a RuDA-NPs + grwpiau Laser. E delweddau staenio H&E o brif organau a thiwmorau o wahanol grwpiau triniaeth, gan gynnwys Halen, Halen + Laser, RuDA, RuDA + Laser, RuDA-NPs, a RuDA-NPs + grwpiau Laser. Изображения окрашивания E H&E основных органов и опухолей из разных групп лечения, включая группы физиологического раствора, физиологического раствора + лазера, RuDA, RuDA + Laser, RuDA-NPs и RuDA-NPs + Laser. E delweddau staenio H&E o brif organau a thiwmorau o wahanol grwpiau triniaeth, gan gynnwys saline, saline + laser, RuDA, RuDA + Laser, RuDA-NPs, a RuDA-NPs + grwpiau Laser.来自 不同 治疗 组 的 主要 器官 和 肿瘤 的 的 E h & e 染色 图像 ， 包括 盐水 盐水 、 盐 水 + 激光 、 ruda 、 ruda + 激光 、 ruda-nps 和 ruda-nps + 激光组 激光组 激光组 激光组 激光组 激光组 激光组来自不同治疗组的主要器官和肿瘤的E H&E Окрашивание E H&E основных органов и опухолей из различных групп лечения, включая физиологический раствор, физиологический раствор + лазер, RuDA, RuDA + лазер, RuDA-NPs и RuDA-NPs + лазер. E staenio H&E o brif organau a thiwmorau o wahanol grwpiau triniaeth gan gynnwys saline, saline + laser, RuDA, RuDA + laser, RuDA-NPs, a RuDA-NPs + laser.Bar graddfa: 60 µm.
Gwerthuswyd effaith ffototherapi in vivo gyda NPs RuDA a RuDA lle cafodd llygod noeth â thiwmorau MDA-MB-231 eu chwistrellu'n fewnwythiennol â NPs RuDA neu RuDA ar ddos sengl o 10.0 µmol kg-1 trwy'r wythïen gynffon, ac yna 8 oriau ar ôl y pigiad.arbelydru laser gyda thonfedd o 808 nm.Fel y dangosir yn Ffigur 8B, cynyddwyd cyfeintiau tiwmor yn sylweddol yn y grwpiau halwynog a laser, sy'n dangos mai ychydig o effaith a gafodd arbelydru halwynog neu laser 808 ar dwf tiwmor.Fel yn y grŵp halwynog, gwelwyd twf tiwmor cyflym hefyd mewn llygod a gafodd eu trin â RuDA-NPs neu RuDA yn absenoldeb arbelydru laser, gan ddangos eu gwenwyndra tywyll isel.Mewn cyferbyniad, ar ôl arbelydru laser, ysgogodd triniaeth RuDA-NP a RuDA atchweliad tiwmor sylweddol gyda gostyngiadau cyfaint tiwmor o 95.2% ac 84.3%, yn y drefn honno, o'i gymharu â'r grŵp a gafodd ei drin â hallt, gan nodi PDT synergyddol rhagorol., wedi'i gyfryngu gan effaith RuDA/CHTV.– NP neu Mwyn O gymharu â RuDA, dangosodd NPs RuDA well effaith ffototherapiwtig, a oedd yn bennaf oherwydd effaith EPR NPs RuDA.Aseswyd canlyniadau atal tyfiant tiwmor ymhellach gan bwysau tiwmor a gafodd ei dynnu allan ar ddiwrnod 15 y driniaeth (Ffig. 8C a Ffig Atodol. 33).Y màs tiwmor cymedrig mewn llygod a gafodd eu trin gan RuDA-NP a llygod a gafodd eu trin gan RuDA oedd 0.08 a 0.27 g, yn y drefn honno, a oedd yn llawer ysgafnach nag yn y grŵp rheoli (1.43 g).
Yn ogystal, cofnodwyd pwysau corff llygod bob tri diwrnod i astudio gwenwyndra tywyll RuDA-NPs neu RuDA in vivo.Fel y dangosir yn Ffigur 8D, ni welwyd unrhyw wahaniaethau sylweddol ym mhwysau'r corff ar gyfer pob grŵp triniaeth. At hynny, ymgymerwyd â staen hematocsilin ac eosin (H&E) o'r prif organau (y galon, yr afu, y ddueg, yr ysgyfaint a'r aren) o wahanol grwpiau triniaeth. At hynny, perfformiwyd staen hematocsilin ac eosin (H&E) o'r prif organau (y galon, yr afu, y ddueg, yr ysgyfaint a'r aren) o wahanol grwpiau triniaeth. Кроме того, было проведено окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) основных органов (сердца, печени, селезенки, легких и почек) из разных групп лечения. Yn ogystal, perfformiwyd staenio hematocsilin ac eosin (H&E) o brif organau (y galon, yr afu, y ddueg, yr ysgyfaint a'r arennau) o wahanol grwpiau triniaeth.此外，对不同治疗组的主要器官（心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏）进行犨有进行犨有进行犨有进行犨有进苏 (H&E) Кроме того, проводили окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) основных органов (сердца, печени, селезенки, легких и почек) в различных группах лечения. Yn ogystal, perfformiwyd staenio hematocsilin ac eosin (H&E) o brif organau (y galon, yr afu, y ddueg, yr ysgyfaint a'r aren) mewn gwahanol grwpiau triniaeth.Fel y dangosir yn Ffig.Nid yw 8E, y delweddau staenio H&E o bum prif organ o'r grwpiau RuDA-NPs a RuDA yn arddangos unrhyw annormaleddau amlwg nac iawndal organau. Nid yw 8E, y delweddau staenio H&E o bum prif organ o'r grwpiau RuDA-NPs a RuDA yn arddangos unrhyw annormaleddau amlwg nac iawndal organau.Fel y dangosir yn ffig.8E, изображения окрашивания H&E пяти основных органов из групп RuDA-NPs и RuDA не демонстрируют явнылипания анграфия. Nid yw delweddau staenio 8E, H&E o bum prif organ o'r grwpiau RuDA-NPs a RuDA yn dangos unrhyw annormaleddau na briwiau organ amlwg.如图8E 所示，来自RuDA-NPs 和RuDA组的五个主要器官的H&E 染色图像没有显示器官的H&E如图8E 所示，来自RuDA-NPs 和RuDA 组的五个主要器官的H&E Как показано на рисунке 8E, изображения окрашивания H&E пяти основных органов из групп RuDA-NPs иплони пания Fel y dangosir yn Ffigur 8E, ni ddangosodd delweddau staenio H&E o'r pum prif organ o'r grwpiau RuDA-NPs a RuDA unrhyw annormaleddau amlwg na difrod organau.Dangosodd y canlyniadau hyn nad oedd RuDA-NP na RuDA yn dangos arwyddion o wenwyndra in vivo. At hynny, dangosodd delweddau staenio H&E o diwmorau y gallai'r grwpiau Laser RuDA + a RuDA-NPs + Laser achosi dinistr difrifol ar gelloedd canser, gan ddangos effeithiolrwydd ffototherapiwtig in vivo rhagorol RuDA a RuDA-NPs. At hynny, dangosodd delweddau staenio H&E o diwmorau y gallai'r grwpiau Laser RuDA + a RuDA-NPs + Laser achosi dinistr difrifol ar gelloedd canser, gan ddangos effeithiolrwydd ffototherapiwtig in vivo rhagorol RuDA a RuDA-NPs.Yn ogystal, dangosodd delweddau tiwmor lliw hematoxylin-eosin y gall grwpiau RuDA + Laser a RuDA-NPs + Laser achosi dinistr difrifol ar gelloedd canser, gan ddangos effeithiolrwydd ffototherapiwtig uwchraddol RuDA a RuDA-NPs in vivo.此外 ， 肿瘤 的 h & e 染色 图像 显示 ， ruda + laser 和 ruda-nps + laser 组均 可 导致 严重 的 癌细胞 破坏 ， 证明 了 了 ruda 和 ruda-nps 的 的 优异 的 体内 光疗 功效 功效。。。 功效 体内 体内 体内 体内 体内 体内 体内 的 的 的 的 的 的 的 的 的此外 ， 肿瘤 的 & e 染色 显示 ， ， ruda + laser 和 ruda-nps + laser 组均 导致 的 癌 细胞 破坏 ， 证明 了 ruda 和 ruda-nps 的 的 的 体内 光疗 。。。。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。。。。 。。.Yn ogystal, dangosodd delweddau tiwmor staen hematoxylin ac eosin fod y ddau grŵp RuDA + Laser a RuDA-NPs + Laser wedi arwain at ddinistrio celloedd canser yn ddifrifol, gan ddangos effeithiolrwydd ffototherapiwtig uwchraddol RuDA a RuDA-NPs in vivo.
I gloi, cynlluniwyd y cymhleth organometalig Ru(II)-arene (RuDA) gyda ligandau math DA i hwyluso'r broses ISC gan ddefnyddio'r dull agregu.Gall RuDA wedi'i syntheseiddio hunan-ymgynnull trwy ryngweithiadau nad ydynt yn gofalent i ffurfio systemau supramoleciwlaidd sy'n deillio o RuDA, a thrwy hynny hwyluso ffurfio 1O2 a thrawsnewid ffotothermol effeithlon ar gyfer therapi canser a achosir gan ysgafn.Mae'n werth nodi na chynhyrchodd RuDA monomerig 1O2 o dan arbelydru laser ar 808 nm, ond gallai gynhyrchu llawer iawn o 1O2 yn y cyflwr cyfanredol, gan ddangos rhesymoldeb ac effeithlonrwydd ein dyluniad.Mae astudiaethau dilynol wedi dangos bod y cynulliad supramoleciwlaidd yn rhoi gwell priodweddau ffotoffisegol a ffotocemegol i RuDA, megis amsugno redshift a gwrthiant ffotobleaching, sy'n ddymunol iawn ar gyfer prosesu PDT a PTT.Mae arbrofion in vitro ac in vivo wedi dangos bod NPs RuDA sydd â biocompatibility da a chroniad da yn y tiwmor yn arddangos gweithgaredd gwrthganser ardderchog a achosir gan olau ar arbelydru laser ar donfedd o 808 nm.Felly, bydd NPs RuDA fel adweithyddion supramoleciwlaidd deufoddol PDT/PTW effeithiol yn cyfoethogi'r set o ffotosensiteiddwyr a weithredir ar donfeddi uwchlaw 800 nm.Mae dyluniad cysyniadol y system uwchfoleciwlaidd yn darparu llwybr effeithlon ar gyfer ffotosensiteiddwyr a weithredir gan NIR gydag effeithiau ffotosensiteiddio rhagorol.
Cafwyd yr holl gemegau a thoddyddion gan gyflenwyr masnachol a'u defnyddio heb eu puro ymhellach.Prynwyd RuCl3 gan Boren Precious Metals Co., Ltd. (Kunming, Tsieina).[(η6-p-cym)Ru(fendio)Cl]Cl (fendio = 1,10-ffenanthroline-5,6-dione) a 4,7-bis[4-(N,N-diphenylamino)ffenyl]-5 Cafodd ,6-Diamino-2,1,3-benzothiadiazole ei syntheseiddio yn ôl astudiaethau blaenorol64,65.Cofnodwyd sbectra NMR ar sbectromedr Bruker Avance III-HD 600 MHz yng Nghanolfan Prawf Dadansoddol Prifysgol Southeastern gan ddefnyddio d6-DMSO neu CDCl3 fel toddydd.Rhoddir sifftiau cemegol δ mewn ppm.mewn perthynas â tetramethylsilane, a rhoddir y cysonion rhyngweithio J mewn gwerthoedd absoliwt mewn hertz.Perfformiwyd sbectrometreg màs cydraniad uchel (HRMS) ar offeryn Agilent 6224 ESI/TOF MS.Perfformiwyd dadansoddiad elfennol o C, H, ac N ar ddadansoddwr elfennol Vario MICROCHNOS (Elementar).Mesurwyd sbectra UV-gweladwy ar sbectrophotometer Shimadzu UV3600.Cofnodwyd sbectra fflworoleuedd ar sbectrofluorimedr Shimadzu RF-6000.Recordiwyd sbectra EPR ar offeryn Bruker EMXmicro-6/1.Astudiwyd morffoleg a strwythur y samplau a baratowyd ar offerynnau FEI Tecnai G20 (TEM) a Bruker Icon (AFM) sy'n gweithredu ar foltedd o 200 kV.Perfformiwyd gwasgariad golau deinamig (DLS) ar ddadansoddwr Nanobrook Omni (Brookhaven).Mesurwyd priodweddau ffotoelectrocemegol ar setiad electrocemegol (CHI-660, Tsieina).Cafwyd delweddau ffotoacwstig gan ddefnyddio system FUJIFILM VisualSonics Vevo® LAZR.Cafwyd delweddau confocal gan ddefnyddio microsgop confocal Olympus FV3000.Perfformiwyd dadansoddiad FACS ar sytomedr llif BD Calibur.Perfformiwyd arbrofion cromatograffaeth hylif perfformiad uchel (HPLC) ar system e2695 Waters Alliance gan ddefnyddio synhwyrydd UV/Vis 2489.Cofnodwyd profion Cromatograffaeth Treiddiad Gel (GPC) ar offeryn Thermo ULTIMATE 3000 gan ddefnyddio synhwyrydd mynegrif plygiannol ERC RefratoMax520.
[(η6-p-cym)Ru(fendio)Cl]Cl (fendio = 1,10-ffenanthroline-5,6-dione)64 (481.0 mg, 1.0 mmol), 4,7-bis[4 -(N,, Cafodd N-diphenylamino)phenyl] -5,6-diamino-2,1,3-benzothiadiazole 65 (652.0 mg, 1.0 mmol) ac asid asetig rhewlifol (30 mL) eu troi mewn oergell adlif am 12 awr.Yna tynnwyd y toddydd mewn gwactod gan ddefnyddio anweddydd cylchdro.Cafodd y gweddillion canlyniadol ei buro gan gromatograffeg colofn fflach (gel silica, CH2Cl2: MeOH = 20: 1) i gael RuDA fel powdr gwyrdd (cynnyrch: 877.5 mg, 80%).anws.Wedi'i gyfrifo ar gyfer C64H48Cl2N8RuS: C 67.84, H 4.27, N 9.89.Wedi dod o hyd: C 67.92, H 4.26, N 9.82.1H NMR (600 MHz, d6-DMSO) δ 10.04 (s, 2H), 8.98 (s, 2H), 8.15 (s, 2H), 7.79 (s, 4H), 7.44 (s, 8H), 7.21 (d, J = 31.2 Hz, 16H), 6.47 (s, 2H), 6.24 (s, 2H), 2.69 (s, 1H), 2 .25 (s, 3H), 0.99 (s, 6H).13C NMR (150 MHz, D6-DMSO), δ (ppm) 158.03, 152.81, 149.31, 147.98, 147.16, 139.98, 136.21, 135.57, 134.68, 130.0.0.18. , 103. , , 86.52, 84.75, 63.29, 30.90, 22.29, 18.83.ESI-MS: m/z [M-Cl]+ = 1097.25.
Synthesis o 4,7-bis[4-(N,N-diethylamino)ffenyl-5,6-diamino-2,1,3-benzothiadiazole (L2): Cafodd L2 ei syntheseiddio mewn dau gam.Ychwanegwyd Pd(PPh3)4 (46 mg, 0.040 mmol) at ateb N, N-diethyl-4- (tributylstannyl) aniline (1.05 g, 2.4 mmol) a 4,7-dibromo-5,6-dinitro - 2, 1,3-benzothiadiazole (0.38 g, 1.0 mmol) mewn tolwen sych (100 ml).Mae'r gymysgedd yn cael ei droi ar 100 ° C am 24 awr.Ar ôl tynnu'r tolwen mewn gwactod, golchwyd y solid canlyniadol ag ether petrolewm.Yna cymysgwyd y cyfansoddyn hwn (234.0 mg, 0.45 mmol) a phowdr haearn (0.30 g, 5.4 mmol) mewn asid asetig (20 ml) ar 80 ° C. am 4 awr.Arllwyswyd cymysgedd yr adwaith i mewn i ddŵr a chasglwyd y solid brown canlyniadol trwy hidlo.Cafodd y cynnyrch ei buro ddwywaith gan sychdarthiad gwactod i roi solid gwyrdd (126.2 mg, cynnyrch 57%).anws.Wedi'i gyfrifo ar gyfer C26H32N6S: C 67.79, H 7.00, N 18.24.Wedi dod o hyd: C 67.84, H 6.95, H 18.16.1H NMR (600 MHz, CDCl3), δ (ppm) 7.42 (d, 4H), 6.84 (d, 4H), 4.09 (s, 4H), 3.42 (d, 8H), 1.22 (s, 12H).13С NMR (150 MHz, CDCl3), δ (ppm) 151.77, 147.39, 138.07, 131.20, 121.09, 113.84, 111.90, 44.34, 12.77.ESI-MS: m/z [M+H]+ = 461.24.
Cafodd cyfansoddion eu paratoi a'u puro gan ddilyn gweithdrefnau tebyg i RuDA.anws.Wedi'i gyfrifo ar gyfer C48H48Cl2N8RuS: C 61.27, H 5.14, N 11.91.Wedi dod o hyd: C, 61.32, H, 5.12, N, 11.81,1H NMR (600 MHz, d6-DMSO), δ (ppm) 10.19 (s, 2H), 9.28 (s, 2H), 8.09 (s, 2H), 7.95 (s, 4H), 6.93 (s, 4H), 6.48 (d, 2H), 6.34 (s, 2H), 3.54 (t, 8H), 2.80 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 1.31 (t, 12H), 1.07 (s, 6H).13C NMR (151 MHz, Cdcl3), δ (ppm) 158.20, 153.36, 148.82, 148.14, 138.59, 136.79, 135.75, 134.71, 130.44, 128.84.84.8.8.8.8., 38.06, 31.22, 29.69, 22.29, 19.19, 14.98, 12.93.ESI-MS: m/z [M-Cl]+ = 905.24.
Diddymwyd RuDA yn MeOH/H2O (5/95, v/v) mewn crynodiad o 10 μM.Mesurwyd sbectrwm amsugno RuDA bob 5 munud ar sbectroffotomedr Shimadzu UV-3600 o dan arbelydru â golau laser â thonfedd o 808 nm (0.5 W/cm2).Cofnodwyd y sbectra ICG o dan yr un amodau â'r safon.
Cofnodwyd y sbectra EPR ar sbectromedr Bruker EMXmicro-6/1 gyda phŵer microdon o 20 mW, ystod sganio o 100 G, a modiwleiddiad maes o 1 G. 2,2,6,6-tetramethyl-4-piperidone (TEMP) a 5,5-dimethyl-1-pyrroline N-ocsid (DMPO) yn cael eu defnyddio fel trapiau troelli.Cofnodwyd sbectra cyseiniant sbin electron ar gyfer hydoddiannau cymysg o RuDA (50 µM) a TEMF (20 mM) neu DMPO (20 mM) o dan weithred ymbelydredd laser â thonfedd o 808 nm (0.5 W / cm2).
Gwnaed cyfrifiadau DFT a TD-DFT ar gyfer RuDA ar lefelau PBE1PBE/6–31 G*//LanL2DZ mewn hydoddiant dyfrllyd gan ddefnyddio rhaglen Gaussian 1666,67,68.Defnyddiwyd rhaglen GaussView (fersiwn 5.0) i ddefnyddio rhaglen GaussView (fersiwn 5.0) i blotio dosraniadau HOMO-LUMO, twll ac electron y wladwriaeth gynhyrfus singlet ynni isel RuDA.
Yn gyntaf fe wnaethom geisio mesur effeithlonrwydd cynhyrchu 1O2 RuDA gan ddefnyddio sbectrosgopeg UV-weladwy confensiynol gydag ICG (ΦΔ = 0.002) fel safon, ond effeithiodd ffotoddiraddio ICG yn gryf ar y canlyniadau.Felly, mesurwyd cynnyrch cwantwm 1O2 RuDA trwy ganfod newid yn nwysedd fflworoleuedd ABDA ar tua 428 nm wrth ei arbelydru â laser â thonfedd o 808 nm (0.5 W / cm2).Perfformiwyd arbrofion ar NPs RuDA a RuDA (20 μM) mewn dŵr / DMF (98/2, v / v) yn cynnwys ABDA (50 μM).Cyfrifwyd y cynnyrch cwantwm o 1O2 gan ddefnyddio'r fformiwla ganlynol: ΦΔ (PS) = ΦΔ (ICG) × (rFS/APS)/(rICG/AICG).rPS a rICG yw cyfraddau adwaith ABDA ag 1O2 a geir o'r ffotosensitydd a'r ICG, yn y drefn honno.APS ac AICG yw amsugnedd y ffotosensitizer a'r ICG ar 808 nm, yn y drefn honno.
Cynhaliwyd mesuriadau AFM mewn amodau hylif gan ddefnyddio'r modd sgan ar system Bruker Dimension Icon AFM.Gan ddefnyddio strwythur agored gyda chelloedd hylif, golchwyd y celloedd ddwywaith ag ethanol a'u sychu â ffrwd o nitrogen.Mewnosodwch y celloedd sych ym mhen optegol y microsgop.Rhowch ddiferyn o'r sampl yn syth yn y pwll o hylif a'i roi ar y cantilifer gan ddefnyddio chwistrell blastig tafladwy di-haint a nodwydd di-haint.Rhoddir gostyngiad arall yn uniongyrchol ar y sampl, a phan fydd y pen optegol yn cael ei ostwng, mae'r ddau ddiferyn yn uno, gan ffurfio menisws rhwng y sampl a'r gronfa hylif.Cynhaliwyd mesuriadau AFM gan ddefnyddio cantilifer nitrid siâp V SCANASYST-FLUID (Bruker, caledwch k = 0.7 N m-1, f0 = 120-180 kHz).
Cafwyd cromatogramau HPLC ar system Waters e2695 gyda cholofn ffenics C18 (250 × 4.6 mm, 5 µm) gan ddefnyddio synhwyrydd UV/Vis 2489.Tonfedd y synhwyrydd yw 650 nm.Camau symudol A a B oedd dŵr a methanol, yn ôl eu trefn, a chyfradd llif y cyfnod symudol oedd 1.0 ml·min-1.Roedd y graddiant (toddydd B) fel a ganlyn: 100% o 0 i 4 munud, 100% i 50% o 5 i 30 munud, ac ailosod i 100% o 31 i 40 munud.Diddymwyd mwyn mewn hydoddiant cymysg o fethanol a dŵr (50/50, yn ôl cyfaint) mewn crynodiad o 50 μM.Cyfaint y pigiad oedd 20 μl.
Cofnodwyd profion GPC ar offeryn Thermo ULTIMATE 3000 gyda dwy golofn PL aquagel-OH MIXED-H (2 × 300 × 7.5 mm, 8 µm) a synhwyrydd mynegrif plygiannol ERC RefratoMax520.Cafodd y golofn GPC ei hoelio â dŵr ar gyfradd llif o 1 ml/munud ar 30°C.Diddymwyd NPs mwyn mewn datrysiad PBS (pH = 7.4, 50 μM), cyfaint pigiad oedd 20 μL.
Mesurwyd ffotoceryntau ar setiad electrocemegol (CHI-660B, Tsieina).Mesurwyd yr ymatebion optoelectroneg pan gafodd y laser ei droi ymlaen ac i ffwrdd (808 nm, 0.5 W/cm2) ar foltedd o 0.5 V mewn blwch du, yn y drefn honno.Defnyddiwyd cell tair electrod safonol gydag electrod carbon gwydrog siâp L (GCE) fel electrod gweithio, electrod calomel safonol (SCE) fel electrod cyfeirio, a disg platinwm fel gwrth-electrod.Defnyddiwyd hydoddiant 0.1 M Na2SO4 fel electrolyt.
Prynwyd llinell gell canser y fron dynol MDA-MB-231 gan KeyGEN Biotec Co, LTD (Nanjing, Tsieina, rhif catalog: KG033).Tyfwyd celloedd mewn monohaenau yn Addasedig Eagle's Medium Dulbecco (DMEM, glwcos uchel) wedi'i ategu gan hydoddiant o serwm buchol ffetws 10% (FBS), penisilin (100 μg/ml) a streptomycin (100 μg/ml).Cafodd pob cell ei meithrin ar 37°C mewn awyrgylch llaith yn cynnwys 5% CO2.
Defnyddiwyd y assay MTT i bennu sytowenwyndra RuDA a RuDA-NPs ym mhresenoldeb ac absenoldeb arbelydru golau, gyda neu heb Vc (0.5 mM).Tyfwyd celloedd canser MDA-MB-231 mewn platiau 96-ffynnon ar ddwysedd cell o tua 1 x 105 celloedd/ml/ffynnon a'u deor am 12 awr ar 37.0°C mewn atmosffer o 5% CO2 a 95% aer.Ychwanegwyd NPs RuDA a RuDA a doddwyd mewn dŵr at y celloedd.Ar ôl 12 awr o ddeori, roedd y celloedd yn agored i ymbelydredd laser 0.5 W cm -2 ar donfedd o 808 nm am 10 munud (300 J cm -2) ac yna eu deor yn y tywyllwch am 24 awr.Yna deorwyd y celloedd â MTT (5 mg/ml) am 5 awr arall.Yn olaf, newidiwch y cyfrwng i DMSO (200 µl) i hydoddi'r crisialau formazan porffor sy'n deillio o hynny.Mesurwyd gwerthoedd OD gan ddefnyddio darllenydd microplate gyda thonfedd o 570/630 nm.Cyfrifwyd y gwerth IC50 ar gyfer pob sampl gan ddefnyddio meddalwedd SPSS o gromliniau dos-ymateb a gafwyd o dri arbrawf annibynnol o leiaf.
Cafodd celloedd MDA-MB-231 eu trin â RuDA a RuDA-NP mewn crynodiad o 50 μM.Ar ôl 12 awr o ddeori, cafodd y celloedd eu harbelydru â laser â thonfedd o 808 nm a phŵer o 0.5 W/cm2 am 10 munud (300 J/cm2).Yn y grŵp fitamin C (Vc), cafodd celloedd eu trin â 0.5 mM Vc cyn arbelydru laser.Yna cafodd celloedd eu deor yn y tywyllwch am 24 awr ychwanegol, yna eu staenio â calcein AM a propidium ïodid (20 μg/ml, 5 μl) am 30 munud, yna eu golchi â PBS (10 μl, pH 7.4).delweddau o gelloedd lliw.
Amser post: Medi-23-2022
